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全基因組測序是對重組細胞的基因組DNA進行深度測序，技術成熟簡單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結合二代測序的檢測方法。LM-PCR全稱連接介導的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進行隨機打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區域的嵌合序列。此擴增產物進行二代測序即可以分析確定載體在宿主基因組上的整合位點。LM-PCR與高通量測序技術相結合后，有了更為豐富的應用場景。比如，識別整合載體（慢病毒載體，轉座子）的整合位點。該技術廣泛應用于基因zhiliao研究基因修飾細胞的克隆組成，或者通過研究整合事件評估新載體系統的生物安全性。插入位點整合位點，推薦唯可生物，實驗實力...

2018年CTL019的一項臨床試驗中，一名B-ALL病人在接受CAR-CD19zhiliao28天后即達到CR，卻在6個月后復發，PCR檢測沒有發現任何的RCL，結合持續性慢病毒插入位點的克隆豐度分析，研究者較終發現一個攜帶CAR插入位點的CAR-B細胞克隆。進而發現這個B細胞是CAR-T生產過程中的一個CAR-B副產物，而CAR在該B細胞上的順式插入表達導致CAR靶標表位屏蔽，導致該B細胞克隆的耐藥。這個案例也提示除去CAR-Tzhiliao方法本身的潛在風險外，CAR-T在生產工藝也會產生二次成瘤的風險。從細胞游離DNA中檢測載體整合位點。嘉興慢病毒載體整合位點從基礎設施的角度來看，必須...

?如果受試者體內出現載體陽性細胞的克隆性生長，或檢測發現基因整合位點在基因或相關基因附近，應縮短檢測間隔至不超過3個月并密切監測惡性liu征兆，直至檢測不到基因zhiliao載體。?對基于慢病毒/逆轉錄病毒載體的基因zhiliao產品，如出現與可復制xingbing毒可能相關的不良事件，還應開展可復制xingbing毒（replicablecompetentlentivirus/retrovirus，RCL/RCR）的檢測。關于基因編輯產品的特殊考慮基因編輯產品除了適用基因zhiliao產品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長期隨訪中還應額外關注脫靶風險，量化評估脫靶活性和在靶活性之間的相...

病人在6個月后達到MRD陰性，CAR-T細胞在4.2年后仍然可以在外周血檢測到，并且骨髓中檢測不到B細胞liu克隆。二代測序整合位點分析顯示這是因為某些CAR-T細胞的融合位置位于TET2基因9號到10號外顯子之間可變剪切區域，導致TET2基因跳讀和功能障礙，從而產生短壽命記憶細胞擴增和長壽命記憶細胞。使得藥物可以持久作用于病人。研究者繼而進行插入位點和CAR-T細胞擴增及持續作用時間的相關研究，利用慢病毒插入位點信息（INSPIIRED）和LASSO logistic 回歸模型進行插入位置和藥效學分析，初步建立預測模型。研究者還建議在CAR-T產品回輸前進行類似的多變量預測可以對產品的安全性...

不同基因zhiliao產品的特殊考慮1.關于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產品，例如轉座子元件、γ-逆轉錄病毒、慢病毒及其他逆轉錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉座子的載體在體外修飾的細胞，長期隨訪中需格外關注基因zhiliao產品的基因組整合風險，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細胞或相關替代細胞的基因組中整合的影響（例如是否存在克隆性生長、是否存在優勢克隆、克隆性生長是否導致惡性liu等）。如果基因組整合相關風險的分析可行。AAV整合位點，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。南通慢病毒整合位點CRO基因編輯產品建議觀察15年...

確證性臨床試驗。與其它藥物一樣，免疫細胞zhiliao產品的確證性研究（或關鍵研究）的目的是確認探索性研究中初步提示的療效和安全性，為注冊提供關鍵的獲益/風險評估證據。確證性研究的目標人群、主要和次要終點的選擇、研究持續時間、樣本量估計和統計學設計等應符合具體zhiliao領域的一般指南要求。對照和設盲，良好的隨機對照試驗（randomizedcontrolledtrial,RCT）是確證性研究中優先推薦的設計方法，該研究方法可以消除受試者的基線差異、減少偏倚，有利于客觀評價試驗產品的zhiliao效果。對于某些適應癥，可能缺少合適的對照藥物，或倫理上不宜采用安慰劑作為對照藥，可考慮與比較好支...

基因zhiliao的前景是巨大的。有超過 7,000 種遺傳病有可能通過基因療法zhiyu。制藥和生物技術公司清楚地認識到 CGT 的潛力，全球TOP 20（按收入計）的生物制藥公司中有 16 家將 CGT 業務添加到其產品組合中。然而，雖然期望、興趣和投資熱情一直很高，但制造和分析基因zhiliao產品的技術仍在不斷發展。這就是為什么像細胞和基因zhiliao這樣的醫學zhiliaogeming需要強大的合作伙伴和技術，以便在這些療法走向批準時帶來嚴謹性和可重復性。實施可擴展的標準化操作程序，并支持臨床試驗和CGT制造的冷鏈物流，對成功至關重要。整合位點相比γ-逆轉錄病毒更安全但成本更高。無...

應用場景：單克隆抗體藥物輔助篩選；致xingbing毒整合位點檢測與整合偏好性分析等；WGS不適用于轉染之后未經過傳代培養和表型篩選的細胞系。豐富的項目經驗目前，唯可已與國內外多家免疫zhiliao研究前沿企業開展合作，采用該方法對高度異質性的CAR-T細胞進行整合位點檢測與細胞安全性評估，具有較為豐富的項目經驗。一般HBV插入到基因組中形成下圖結構。使用三代測序，靶向插入區域的測序reads可分為Readsgroup1（HBV插入區域測通）和Readsgroup2（reads部分比對染色體，部分比對HBV插入區域）?；谌鷶祿葘骲am文件的IGV圖，判斷變異類型，推斷斷點類型和插入序列...

2020年9月發布的《細胞zhiliao產品申請臨床試驗藥學研究和申報資料的考慮要點》“生產工藝開發的技術要求”及“質量研究和質量控制中的安全性研究”部分要求提供目的基因在染色體中的整合情況及提供細胞惡性轉化（成瘤性和致瘤性）進行安全性研究和評估內容。2020年2月發布的《免疫細胞zhiliao產品臨床試驗技術指導原則（試行）》中規定：探索性臨床試驗的安全性和耐受性要考慮"外源基因隨機整合到細胞基因組形成插入突變，導致成瘤性和惡性轉化等"。整合位點分析,基因和細胞的安全指南。深圳病毒載體整合位點實驗室迎細胞基因zhiliao浪潮，整合位點分析方法來助力生物制藥的研發成為焦點。在創新藥領域，細胞...

全基因組測序是對重組細胞的基因組DNA進行深度測序，技術成熟簡單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結合二代測序的檢測方法。LM-PCR全稱連接介導的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進行隨機打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區域的嵌合序列。此擴增產物進行二代測序即可以分析確定載體在宿主基因組上的整合位點。LM-PCR與高通量測序技術相結合后，有了更為豐富的應用場景。比如，識別整合載體（慢病毒載體，轉座子）的整合位點。該技術廣泛應用于基因zhiliao研究基因修飾細胞的克隆組成，或者通過研究整合事件評估新載體系統的生物安全性。AAV整合位點，推薦唯可生物，實驗實力強...

插入突變風險評估一些整合性載體（如逆轉錄病毒、慢病毒、轉座子）可將外源基因插入整合到細胞基因組中，這可能會導致關鍵基因突變或jihuo原基因，從而導致惡性liu風險增加。影響插入突變的關鍵風險因素包括：（1）載體的整合特征，如插入位點的偏好性；（2）載體的設計，如增強子、啟動子等構建元件的活性，影響鄰近基因的潛力；產生剪接突變體的潛在剪接位點或多聚腺苷酸信號等；（3）細胞載體拷貝數；4）轉基因表達產物的功能活性（如與細胞生長調控相關）和表達水平；5）靶細胞群的轉化可能性，這可能與細胞的分化狀態、增殖潛力、體外培養條件和體內植入環境等有關。整合位點實驗室，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測...

給藥間隔，對于shou次在人體中開展臨床試驗（firstinhuman,FIH）的免疫細胞zhiliao產品，采用受試者間隔給藥的方式，可以避免多個受試者同時暴露而出現預期外的安全性風險。在FIH試驗中，對首例患者應加強不良事件監測，還要考慮遲發性不良事件。向同一劑量組內下一例受試者或下一個劑量組受試者給藥前，應規定一定的隨訪間隔，以觀察急性和亞急性不良事件。間隔期的選擇一般基于非臨床研究中急性或亞急性毒性的發生情況，細胞在體內的活性持續時間和/或既往類似產品在人體中的應用經驗。整合位點鑒定一般用什么方法？？嘉興插入位點整合位點評估全基因組測序是對重組細胞的基因組DNA進行深度測序，技術成熟簡...

耐受劑量（maximumtolerancedose,MTD）通常通過劑量遞增設計實現。細胞zhiliao產品可接受的毒性或不良反應的嚴重程度，會基于疾病的嚴重性和獲益風險預期進行判斷，申請人應在研究方案中明確探索方法。對于免疫細胞zhiliao產品，可以通過劑量探索確定其生物學活性范圍或比較好有效劑量，如果在較低劑量水平可以觀察到穩定的生物學活性或臨床獲益，申請人可能不必要確定MTD。此外，很多免疫細胞zhiliao產品受制備及運輸等實際情況的限制，只能達到特定的暴露量范圍，臨床試驗中可能只能觀察部分劑量水平的安全性特征，而無法確定MTD。但須認識到，早期研究往往難以準確估計產品的有效推薦劑量...

應用場景：單克隆抗體藥物輔助篩選；致xingbing毒整合位點檢測與整合偏好性分析等；WGS不適用于轉染之后未經過傳代培養和表型篩選的細胞系。豐富的項目經驗目前，唯可已與國內外多家免疫zhiliao研究前沿企業開展合作，采用該方法對高度異質性的CAR-T細胞進行整合位點檢測與細胞安全性評估，具有較為豐富的項目經驗。一般HBV插入到基因組中形成下圖結構。使用三代測序，靶向插入區域的測序reads可分為Readsgroup1（HBV插入區域測通）和Readsgroup2（reads部分比對染色體，部分比對HBV插入區域）?；谌鷶祿葘骲am文件的IGV圖，判斷變異類型，推斷斷點類型和插入序列...

通常不需要進行標準的遺傳毒性組合試驗，但應根據基因zhiliao產品的特點、產品的具體適應癥、載體的已有信息、導入基因序列結構等，評估基因zhiliao產品整合進基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發生情況，并檢測隨后可能發生的異常細胞行為；評估插入突變（插入位點、插入拷貝數等）引起的遺傳毒性風險。當基因zhiliao產品采用基因編輯或轉座子技術時，需要關注脫靶編輯、轉座子轉座印跡引起的遺傳毒性問題；鑒定/表征基因組整合位點。ISA整合位點，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。江蘇CAR-T整合位點服務迎細胞基因zhiliao浪潮，整...

細胞和基因療法可進一步分為體內zhiliao和體外zhiliao，體外zhiliao是將患者的體細胞從體內分離，在體外進行培養并使用攜帶有正常基因片段的載體修復突變基因，通過注射的方法將改良后的細胞回輸入患者體內以進行疾病的zhiliao。體內zhiliao是利用較為直接的方法對局部或全身注射含有修復基因片段的病毒或非病毒載體，常用AAV等非整合型載體。利用慢病毒載體導入外源序列時其插入位置具有隨機性，可能會引起正?；蚴Щ睿绻迦肽承┛刂萍毎至训幕蛑袝е伦?。所以檢測重組細胞的整合位點來評價細胞的安全性就顯得尤為重要。CAR-T整合位點，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，...

如果免疫細胞zhiliao產品擬與其他藥物或zhiliao方法聯合zhiliao，有必要通過探索性試驗觀察聯合zhiliao的安全和耐受性，以及其他藥物或zhiliao方法對免疫細胞zhiliao產品體內活性、增殖或存活、給藥頻率等的影響。如果免疫細胞zhiliao產品擬與其他藥物或zhiliao方法聯合zhiliao，有必要通過探索性試驗觀察聯合zhiliao的安全和耐受性，以及其他藥物或zhiliao方法對免疫細胞zhiliao產品體內活性、增殖或存活、給藥頻率等的影響。體內活性評估。探索性試驗的一個常見次要目的是對產品活性進行初步評估，例如，細胞在體內的增殖存活和生物分布（如藥代動力學）...

全基因組測序是對重組細胞的基因組DNA進行深度測序，技術成熟簡單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結合二代測序的檢測方法。LM-PCR全稱連接介導的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進行隨機打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區域的嵌合序列。此擴增產物進行二代測序即可以分析確定載體在宿主基因組上的整合位點。LM-PCR與高通量測序技術相結合后，有了更為豐富的應用場景。比如，識別整合載體（慢病毒載體，轉座子）的整合位點。該技術廣泛應用于基因zhiliao研究基因修飾細胞的克隆組成，或者通過研究整合事件評估新載體系統的生物安全性。整合位點政策，推薦唯可生物，實驗實力強，...

在開展除惡性liu外其他適應癥的臨床研究時，每一劑量水平的受試者數量還應考慮不同適應癥人群對風險的可接受程度，或者安全性的評價要求，可能需要通過更大的樣本量提供更充分的安全性信息。此外，其他研究目的，如耐受性、制備可行性和藥理學活性評估，也可能影響樣本量或劑量增幅的選擇。免疫細胞zhiliao產品可能在受試者體內長期存活，在對產品毒性和活性持續時間有初步了解之前，可能較難預測重復給藥的風險。因此，很多shou次用于人體的免疫細胞zhiliao產品采用單次給yaofang案。但是，對于某些產品如zhiliao性細胞疫苗，當已有研究證據提示安全性風險較低且多次給藥可能增加活性時，在早期試驗中有可能...

在國家藥典委員會公布的《人用基因制品總論》（草案）的3.1條款中，特別指出：“應檢測重組載體基因組或質粒的完整性和均一性，載體和zhiliao序列的遺傳穩定性”；“對于病毒載體，適當情況下應測定插入位點，并充分評估插入突變的可能性和相關風險”。對此，可分別采用宿主細胞全基因組重測序方法和LM-PCR結合二代測序方法為研究人員提供整合位點檢測服務。通過測序分析可對整合位點相關基因進行功能分析，對整合位點偏好性畫像，從而評估病毒載體的安全性。整合位點方法，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。溫州ISA整合位點報告遺傳物質整合到宿主基因組中、患者長期處于免疫抑制狀態誘發（惡...

慢病毒整合事件要素及檢測方法要求：對于食藥監局指導性文件和既往研究內容，我們不難發現對于慢病毒整合檢測所謂整合事件至少包含三個要素：整合位置；整合方向；特定整合位置和整合方向的juedui克隆數目；因此檢測在定性和定量性能方面都有要求，檢測方法需要結合臨床樣本進行分析性能進行系統驗證。慢病毒整合位點檢測方法，目前檢測慢病毒整合位點的主要平臺為高深度測序（NGS)。而目前較為成熟已經應用于工業產品檢測及臨床研究的整合位點富集建庫方法為機械片段化及依賴于接頭的擴增子建庫(LM-PCR,如INSPIIRED),已經應用于多個CART19臨床項目的安全性評估及與CAR-T細胞增值相關的回顧yao效學分...

f如果RCT設計不可行，申請人可能在確證性臨床試驗中采用單臂試驗（singlearmtrial,SAT）。在這種情況下，申請人應解釋無法開展RCT試驗的理由并提供相應研究證據，并有必要利用回顧性數據、前瞻性真實世界研究、薈萃分析或流行病學調查等數據及探索性研究結果，對受試人群、主要終點和預期臨床療效等研究要素進行合理說明。RCT確證性試驗應在可行的情況下盡量保持盲法。對于很多免疫細胞zhiliao產品，由于研究者或醫務人員參與細胞的采集并配合操作給藥過程，可能難以對研究者設盲，這種情況下有必要采用其它方法降低試驗的偏倚，例如對受試者設盲。如果盲法不可行，如SAT，應設立不受研究者影響的單獨審評...

靶細胞群的轉化可能性，這可能與細胞的分化狀態、增殖潛力、體外培養條件和體內植入環境等有關。基于已有科學經驗和既往非臨床/臨床研究結果，如果認為基因修飾細胞所采用的載體系統可將外源基因整合到細胞基因組中并可在體內長期存續，需綜合分析以上風險因素，評估潛在的插入突變、致瘤/致性風險。非臨床研究，應采用具有代表性的基因轉導細胞進行基因整合位點分析，分析細胞的克隆組成以及在關注基因（如liu相關調控基因）附近有無優先整合跡象，含有關注整合位點的細胞有無優先異常增殖。crispr/cas9整合位點，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高?；蚓庉嬚衔稽c技術應用場景：單克隆抗體藥物...

不同基因zhiliao產品的特殊考慮1.關于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產品，例如轉座子元件、γ-逆轉錄病毒、慢病毒及其他逆轉錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉座子的載體在體外修飾的細胞，長期隨訪中需格外關注基因zhiliao產品的基因組整合風險，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細胞或相關替代細胞的基因組中整合的影響（例如是否存在克隆性生長、是否存在優勢克隆、克隆性生長是否導致惡性liu等）。如果基因組整合相關風險的分析可行。整合位點CRO，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。深圳整合位點政策給藥間隔，對于shou次在人體中開...

給藥間隔，對于shou次在人體中開展臨床試驗（firstinhuman,FIH）的免疫細胞zhiliao產品，采用受試者間隔給藥的方式，可以避免多個受試者同時暴露而出現預期外的安全性風險。在FIH試驗中，對首例患者應加強不良事件監測，還要考慮遲發性不良事件。向同一劑量組內下一例受試者或下一個劑量組受試者給藥前，應規定一定的隨訪間隔，以觀察急性和亞急性不良事件。間隔期的選擇一般基于非臨床研究中急性或亞急性毒性的發生情況，細胞在體內的活性持續時間和/或既往類似產品在人體中的應用經驗。MAPS:基因整合位點高通量測序分析的新方法。嘉興基因編輯整合位點服務申請人可以基于總體臨床研究規劃考慮早期探索性研...

確證性臨床試驗。與其它藥物一樣，免疫細胞zhiliao產品的確證性研究（或關鍵研究）的目的是確認探索性研究中初步提示的療效和安全性，為注冊提供關鍵的獲益/風險評估證據。確證性研究的目標人群、主要和次要終點的選擇、研究持續時間、樣本量估計和統計學設計等應符合具體zhiliao領域的一般指南要求。對照和設盲，良好的隨機對照試驗（randomizedcontrolledtrial,RCT）是確證性研究中優先推薦的設計方法，該研究方法可以消除受試者的基線差異、減少偏倚，有利于客觀評價試驗產品的zhiliao效果。對于某些適應癥，可能缺少合適的對照藥物，或倫理上不宜采用安慰劑作為對照藥，可考慮與比較好支...

CAR-T慢病毒載體整合的潛在安全性隱患包括CAR-Tzhiliao在內的基因編輯性細胞zhiliao方法，采用慢病毒整合性載體將外源基因插入整合到細胞基因組中，某些插入位置可能會導致關鍵基因突變或jihuo原基因，從而導致惡性liu風險增加。因載體整合導致致瘤性基因變異及新發細胞變稱為二次成瘤。在持續性細胞zhiliao過程中，這種潛在的成瘤性不良反應的發生時間往往會有明顯的滯后性且很難預測。因此CAR-Tzhiliao需要評估潛在的插入突變風險和致性風險。整合位點評估，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。蘇州LV整合位點安全性評價在國家藥典委員會公布的《人用基因制...

?如果受試者體內出現載體陽性細胞的克隆性生長，或檢測發現基因整合位點在基因或相關基因附近，應縮短檢測間隔至不超過3個月并密切監測惡性liu征兆，直至檢測不到基因zhiliao載體。?對基于慢病毒/逆轉錄病毒載體的基因zhiliao產品，如出現與可復制xingbing毒可能相關的不良事件，還應開展可復制xingbing毒（replicablecompetentlentivirus/retrovirus，RCL/RCR）的檢測。關于基因編輯產品的特殊考慮基因編輯產品除了適用基因zhiliao產品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長期隨訪中還應額外關注脫靶風險，量化評估脫靶活性和在靶活性之間的相...

免疫細胞zhiliao產品的風險水平與多種因素有關，如細胞來源和類型、體內活性和存活時間、是否有外源基因表達、基因表達使用的載體類型以及是否存在基因組整合等。針對不同風險水平的免疫細胞zhiliao產品，隨訪持續時間的建議如下：?對于沒有外源基因表達、且體外操作不改變細胞存活時間及分化潛能的免疫細胞zhiliao產品，長期隨訪的持續時間不應短于細胞在體內的自然存活時間，建議對受試者進行1年或以上的隨訪。對于有外源基因表達、但不存在基因整合或基因重組風險，或載體的基因整合或重組風險較低的免疫細胞zhiliao產品，建議對受試者進行不少于5年的隨訪。?對于有外源基因表達、而且表達載體存在基因整合或...

當載體或基因zhiliao產品原有的風險特征增加時，例如經過修飾以攜帶基因組編輯成分的質?；蚋淖兘oyaofang式以提高整合能力等，需要提高對長期隨訪觀察的要求；反之，也可以對目前認為存在遲發風險的基因zhiliao載體進行修飾，以降低這些風險。長期表達，與其他產品相比，部分基因zhiliao產品的明顯特征是可以在患者靶細胞或基因修飾細胞中持續存在并編碼表達作用因子（功能性蛋白或基因表達調節元件），并通過長久或長期改變靶細胞或組織的功能來達到zhiliao效果。同時，由于基因zhiliao編碼的作用因子在體內的長期暴露或表達異常，可能產生與其功能相關的長期安全性風險，如細胞生長失控和惡性liu...