國內外基因zhiliao產品開展的非臨床研究、長期隨訪獲得的臨床經驗以及基因組整合位點分析方法的明顯改進，都有助于更好地理解整合性基因zhiliao載體相關風險。通常認為，很多能夠介導外源基因轉入細胞核的載體（如逆轉錄病毒載體、轉座子元件和基因編輯產品等）有基因組整合潛力，需要通過長期隨訪觀察遲發性不良反應的風險；根據目前的認識和研究數據，質粒、痘病毒、腺病毒和腺相關病毒（AAV）等載體的基因zhiliao產品整合風險較低，國際上開展的臨床試驗中也表現出較低的遲發性不良反應風險。當載體或基因zhiliao產品原有的風險特征增加時，例如經過修飾以攜帶基因組編輯成分的質粒或改變給yaofang式以提高整合能力等，需要提高對長期隨訪觀察的要求；反之，也可以對目前認為存在遲發風險的基因zhiliao載體進行修飾，以降低這些風險。針對已經獲得的有切割能力的sgRNA，需要進一步明確其體內脫靶效應。杭州高精度脫靶檢測政策

CIRCLE-seq原理。細胞內檢測方法由于提純的基因組已經消化去除了組蛋白，結構較細胞內的染色質更為松散，理論上容易找到更多的脫靶位點。為捕獲CRISPR在細胞內工作時真實發生的脫靶切割，研究者們也設計了一些細胞內的脫靶位點檢測方法。1) Guide-seqCRISPR造成DNA雙鏈斷裂后，由于DNA修復機制的存在，斷裂處很快就會重新連接，這時候提純基因組DNA很難保留CRISPR造成的DNA斷裂位點。所以為了記錄細胞內真實的CRISPR脫靶切割，研究者們設計了Guide-seq[10]，利用NHEJ的DNA修復機制，將一段雙鏈短核苷酸序列（dsODN）連接到CRISPR造成的DNA雙鏈斷裂處，相當于連接了一輪接頭，然后再正常打斷基因組，在另一側連接第二輪接頭。通過這種方式構建的文庫，就可以獲取脫靶位點一側的序列。雖然每次CRIPSR導致的DNA雙鏈斷裂并不一定都會連接dsODN，但反過來說，越容易連接dsODN的位點，其發生脫靶切割的概率越高。通過Guide-seq找到的脫靶位點偏少，但一般都是可信度較高的脫靶位點，Guide-seq也是目前比較公認的一種脫靶檢測方法。蘇州定量脫靶檢測guide-sequence基因編輯技術脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。

采用基因編輯技術制備的細胞產品。對于采用基因編輯技術制備的基因修飾細胞產品，應進行體外在靶和脫靶活性評估，以確認修飾酶或向導RNA對靶基因序列的特異性。在評估基因編輯的脫靶風險時，應說明所選擇的評價策略的合理性和敏感性。雖然采用計算機分析預測基因編輯的潛在脫靶位點，并對潛在脫靶位點進行深度測序分析，可用于評估基因編輯的脫靶風險；但選擇的評價策略仍應包含體外全基因組測序比對，以證明潛在脫靶位點未出現脫靶。此外，在評估脫靶活性時，還應評估種屬特異性的差異、細胞病理生理狀態的差異或細胞類型的差異對非臨床數據預測性的影響。必要時，還應分析基因編輯對細胞表型和生理功能的潛在影響。

基因zhiliao產品特有的可能會引起遲發性不良反應的風險因素包括：基因組整合活性基因zhiliao產品可能會采用修飾宿主基因組的技術，并有可能在宿主細胞或組織中持續存在。很多基因zhiliao載體的基因整合不會指向基因組的特定位點，可能在整合位點處產生插入突變、或jihuo整合位點附近的原基因等，進而破壞重要基因功能或增加惡性liu的風險，例如，國外已有多項研究報告在接受了使用γ-逆轉錄病毒載體轉導的基因修飾細胞zhiliao的受試者中發生白血病。因此，對于存在此類風險的產品，有必要進行長期隨訪臨床研究以評估出現遲發不良反應的風險。脫靶檢測技術，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。

CRISPR基于sgRNA與基因組序列互補定位到靶位點，不論哪種CRISPR系統，都存在sgRNA序列不完全匹配但能夠結合基因組的脫靶現象，CRISPR定位到脫靶位點引發序列改變就屬于第二類風險。CRISPR技術誕生剛過10年，期間迅速取代TALEN和ZFN，成為學術界通用的基因編輯技術，也徹底改變了我們的生物學研究方法。為提高CRISPR技術的安全性，特別是往臨床應用發展時的安全性問題，研究者們一直以提高靶位點的編輯效率和準確性，同時降低脫靶位點編輯發生概率為目標，來優化CRISPR技術。另一方面，研究者們也開發了大量檢測方法，用于檢測CRISPR的靶向風險和脫靶風險，用于早期sgRNA序列的篩選，以期望獲得一個較為安全的sgRNA。脫靶檢測安全性評價，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。蘇州定量脫靶檢測guide-sequence

隨著脫靶影響因素、降低策略及脫靶檢測技術研究的不斷深入，未來CRISPR/Cas9系統將在更多領域造福人類。杭州高精度脫靶檢測政策

gRNA的長度和錯配： 17個核苷酸長度的gRNA顯示出更高的基因組編輯效率。相比之下，18-20 bp的長度顯示出較低的基因組編輯效率。在人類細胞中減少潛在脫靶效應的指導方針：1) 應避免在PAM的7-10 bp范圍內靶序列有超過3個錯配；2) 在PAM的12 bp內，應避免sgRNA 凸起以減少脫靶效應。gRNA的化學修飾：在gRNA核糖磷酸骨架中加入2?-O-甲基-3?-膦酰基乙酸酯會導致位點特異性修飾，使脫靶切割減少40-120倍，同時保持靶向性能。gRNA上游5'發夾結構的修飾可以提高Cas9和Cas12的特異性，降低脫靶效應。杭州高精度脫靶檢測政策