有許多方法可以實現快速光柵掃描,例如使用振鏡進行快速2D掃描,以及將振鏡與可調電動透鏡相結合進行快速3D掃描。而可調電動式鏡頭由于機械慣性的限制,無法在軸向快速切換焦點,影響成像速度。現在它可以被空間光調制器(SLM)取代。遠程對焦也是實現3D成像的一種手段,如圖2所示。LSU模塊中,掃描振鏡水平掃描,ASU模塊包括物鏡L1和反射鏡M,通過調整M的位置實現軸向掃描該技術不僅可以校正主物鏡L2引入的光學像差,還可以進行快速軸向掃描。為了獲得更多的神經元成像,可以通過調整顯微鏡的物鏡設計來放大FOV。然而,大NA和大FOV的物鏡通常很重,不能快速移動以進行快速軸向掃描,因此大FOV系統依賴于遠程聚焦、SLM和可調電動透鏡。多光子顯微鏡銷售渠道分析及建議。模塊化多光子顯微鏡焦點激發
多光子激發掃描顯微成像系統的不足。只能對熒光成像。如果樣品包括能夠吸收激發光的色團,如色素,樣品可能受到熱損傷。分辨率略有降低,雖然可以通過同時利用共焦的小孔得到改善,但是信號會有損耗。受昂貴的超快激光器限制,多光子掃描顯微鏡的成本較高。多光子激發顯微鏡應用舉例。動物和腦片神經細胞結構與功能、動物腦皮層的成像、胚胎發育過程的長時間動態觀測、多光子激發光解籠、細胞內微區鈣動力學、多光子激發自發熒光、其它應用。模塊化多光子顯微鏡成像區域證實了多光子顯微鏡對皮膚和別的皮膚病的診斷的可行性。
快速光柵掃描有多種實現方式,使用振鏡進行快速2D掃描,將振鏡和可調電動透鏡結合在一起進行快速3D掃描,但可調電動透鏡由于機械慣性的限制在軸向無法快速進行焦點切換,影響成像速度,現可使用空間光調制器(SLM)代替。遠程聚焦也是一種實現3D成像的手段。在LSU模塊中,掃描振鏡進行橫向掃描,ASU模塊包括物鏡L1和反射鏡M,通過調控M的位置實現軸向掃描。該技術不僅可以校正主物鏡L2引入的光學像差,還可以進行快速的軸向掃描。想要獲得更多神經元成像,可以通過調整顯微鏡的物鏡設計來擴大FOV,但是具有大NA和大FOV的物鏡通常重量較大,無法快速移動以進行快速軸向掃描,因此大型FOV系統依賴于遠程聚焦、SLM和可調電動透鏡。
當細胞受到外界刺激時,隨著刺激時間的增加,即使繼續刺激,Ca2+熒光信號也不會繼續增強,反而會減弱,直至恢復到無刺激時的水平。對于細胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化,發現粘附過程中Ca2+熒光信號沒有變化,但當配子融合時,Ca2+熒光信號強度出現一個不穩定的峰值,持續數分鐘。這些現象對于研究受精發育的早期信號以及Ca2+在卵子和受精卵發育中的作用具有重要意義。在其他生理過程中,如細胞分裂和胞吐,Ca2+熒光信號的強度也會發生很大的變化。顯微鏡產品正拉動市場需求,多光子顯微鏡市場發展潛力巨大。
以往我們認識的光電效應是單光子光電效應,即一個電子在極短時間內能吸收到一個光子而從金屬表面逸出。強激光的出現豐富了人們對于光電效應的認識,用強激光照射金屬,由于其光子密度極大,一個電子在短時間吸收多個光子成為可能,從而形成多光子電效應,這已被實驗證實。為什么一般討論的光電效應都是指單光子光電效應呢?這是因為,在使用普通光源的情況下,電子吸收兩個以上光子能量的概率是非常非常小的,幾乎為零。事實上,愛因斯坦本人就考慮過在強光下發生光電效應的可能性問題。對此,他有如下的論述:光電效應中的一個電子吸收兩個光子的幾率不會大于下雨天兩個雨滴同事打在一個螞蟻上的幾率。因此,多光子光電效應在實驗上的研究成為可能,是二十世紀六十年代激光乃至強激光出現以后的事情。有了激光,對于雙光子光電效應,在實驗上和理論上均取得了許多成果。利用強激光,人們不僅觀察到雙光子和三光子的光電效應,甚至觀察到金靶材吸收幾十個等效光子實驗現象。國內市場多光子顯微鏡銷售渠道。美國飛秒激光多光子顯微鏡代理商
從產品類型及技術方面來看,正置顯微鏡占據絕大多數市場。模塊化多光子顯微鏡焦點激發
單束掃描技術可以高速遍歷大視場(FOV)的神經組織:使用MPM對神經元進行成像時,通過隨機訪問掃描—即激光束在整個視場上的任意選定點上進行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經元,這樣不僅避免掃描到任何未標記的神經纖維,還可以優化激光束的掃描時間。隨機訪問掃描(圖1)可以通過聲光偏轉器(AOD)來實現,其原理是將具有一個射頻信號的壓電傳感器粘在合適的晶體上,所產生的聲波引起周期性的折射率光柵,激光束通過光柵時發生衍射。通過射頻電信號調控聲波的強度和頻率從而可以改變衍射光的強度和方向,這樣使用1個AOD就可以實現一維橫向的任意點掃描,利用1對AOD,結合其他軸向掃描技術可實現3D的隨機訪問掃描。但是該技術對樣本的運動很敏感,易出現運動偽影。目前,快速光柵掃描即在FOV中進行逐行掃描,由于利用算法可以輕松解決運動偽影而被普遍的使用。模塊化多光子顯微鏡焦點激發