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甘肅大鼠免疫組化要多久

來源: 發布時間:2025-07-09

免疫組化的優缺點

免疫組化的優點在于其高特異性和敏感性,能夠在組織原位檢測目標蛋白的表達和分布。此外,免疫組化可以與其他技術(如熒光顯微鏡、電子顯微鏡)結合,提供更豐富的信息。然而,免疫組化也存在一些缺點。首先,實驗步驟復雜,需要優化多個參數(如一抗濃度、孵育時間)。其次,免疫組化的結果可能受到組織固定、抗原修復等因素的影響,導致假陽性或假陰性結果。此外,免疫組化的定量分析相對困難,通常只能進行半定量分析。 有沒有做免疫組化比較好的公司?甘肅大鼠免疫組化要多久

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免疫組化的局限性,可能會有假陽性。陽性信號定位不正確即為假陽性,包括著色不勻、背景著色、邊緣效應,另外組織的某些特定成分也能導致假陽性結果。假陽性可能的原因有:(1)一抗濃度及一抗是否失效,抗體有一個合適的濃度范圍且必須在有效期內使用,過期的抗體或者不著色,或者背景著色,形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織,組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時間過長,由于室溫的影響夏季孵育時間稍短,冬季孵育時間稍長;(4)操作過程中組織變干,造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,產生假陽性;(5)3,3'-二氨基聯苯胺(DAB)顯色時間太長,DAB宜現配現用,配制時間比較好在30min以內;(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質,因此間質和胞漿中出現很多非特異性的染色,如內源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色,可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細胞、淋巴細胞也會產生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中,使壞死組織呈較高的背景染色,在免疫組化中應避免選擇壞死組織較多的蠟塊。福建免疫組化哪家好免疫組化結果怎么看?

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免疫組化分類中免疫酶標方法,英瀚斯生物為您介紹。免疫酶標方法是繼免疫熒光后,于60年代發展起來的技術。基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前定位準確、對比度好、染色標本可長期保存,適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發展非常迅速,已經衍生出了多種標記方法,目前在病理診斷中廣為使用的當屬***法(過氧化物酶-抗過氧化物酶)、ABC法(卵白素-生物素-過氧化物酶復合物)、SP法(鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶)、即用型二步法(聚合物鏈接)等。

免疫組化在臨床應用中,還能及時準確的發現微小轉移灶。英瀚斯生物專業做實驗外包服務,一站式醫學科研平臺。采用常規病理方法難以檢出的實體瘤轉移稱為微小轉移灶。在常規組織切片中,辨別單個或幾個轉移性cancer細胞很難,淋巴結內竇性組織細胞增生與某些cancer的早期轉移有時也不易區別,而采用免疫組化方法,有助于及時準確的發現微小(cancer)轉移灶。對乳腺cancer而言主要是腋窩淋巴結的檢測,淋巴結微轉移患者預后差,這對進一步醫療和預后判斷十分有意義。如何做好免疫組化實驗?

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細胞爬片免疫組化檢測實驗步驟

1、選擇貼壁良好的細胞爬片,用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2、PBS洗3次,每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內源性過氧化物酶。

4、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。

5、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過夜。

6、PBS洗3次,每次5min。


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7、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗,4℃孵育50min。

8、PBS洗3次,每次5min。

9、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。

10、顯色完全后,蒸餾水或自來水沖洗,蘇木素復染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來水沖洗,氨水返藍,流水沖洗。

11、切片經過梯度酒精(70-100%)10min一個梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹膠封固。 免疫組化如何得到好的效果?福建免疫組化哪家好

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關于免疫組化的封閉:用和二抗來源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min,然后甩去封閉用血清,勿洗;注意:封閉時間根據具體實驗調整;封閉液一般選用5%BSA或與二抗來源一致的血清,切記是BSA,不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了。①使用血清好還是BSA好?答:***是待檢樣本會非特異性的和蛋白結合,從而導致背景過高,因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結合,從這點看,BSA和血清沒有明顯區別。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體,可以和抗體恒定區結合,與抗體特異性無關,封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結合。BSA則無法封閉Fc受體。甘肅大鼠免疫組化要多久

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